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可能的原因

建议解决方法

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没有选择最合适的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂

针对待bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不细胞选择最适的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂是 获得高bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不效率的关键。如果您对选择我们哪一种bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂没有把握,请致电至 info@signagen-china.com寻求技术支持。

没有生成高效率的DNA-bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂复合物

制备生成DNA-bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂复合物时,请不要使用任何含有血清的产品。在大多数情况下,使用不含血清的DMEM培养液能获得高效率的DNA-bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂复合物。
注意:请避免使用Opti-MEM培养液,即使其血清含量较低。

在生成DNA-bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂的过程中存在抑制复合物形成的抑制剂。

不含血清的培养液是高效DNA-bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂复合物形成的关键。在生成复合物过程中,避免使用以下化学物质:高浓度的磷酸盐;硫酸软骨素透明质酸硫酸葡聚糖或其它硫酸化的蛋白聚糖

阳离子型脂质体被意外冷冻保存。

务必将以下阳离子型脂质体保存于+4度环境,-20或者-80度冷藏将显着降低其bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不效率:LipoD293?, LipoJet?PowerFect?等。

细胞密度未优化。

DNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不和DNA-siRNA共bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不过程中,控制细胞密度在60~70%之间;siRNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不过程中,控制细胞密度在50%左右。

使用了次优化的反应条件,如bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂的用量,DNA用量和DNA-bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂复合物的形成时间等参数没有优化。

如果您不清楚最优化的反应条件或者不知道如何针对待bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不细胞进行条件优化,请致电至 info@signagen-china.com寻求技术支持。

确定bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不效率的方法学问题。

建议每次bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不时,设定一个阳性对照,如绿色荧光蛋白(GFP)

所使用DNA的启动子不能被待bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不细胞所识别。

在bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不实验前,请确认所bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不DNA确实能在待bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不细胞内表达。

在使用GenMute?GenJet?, PowerFect?PepMute? siRNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂和LipoJet? DNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂时,没有使用与之匹配的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不缓冲液。

GenMute?GenJet?, PowerFect?PepMute? siRNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂和LipoJet? DNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂均配有特制的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不缓冲液。为了获得高效率bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不,请务必严格按照转试剂的操作步骤进行,在形成DNA-bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂或者siRNA-bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂复合物时,请务必使用与之匹配的缓冲液。

将bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物长时间放置于室温。

bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物的最佳放置时间和温度是室温条件下10~20分钟,长时间放置会显着地降低bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不效率,请务必控制放置时间在20 分钟之内。.

使用LipoD293?和 PolyJet?bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂时,细胞的密度太低。

使用LipoD293?和 PolyJet?bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂时,细胞的密度控制在~70%为宜。

极高转速离心bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物。

在形成bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物时,标准操作步骤推荐数秒内涡旋混合bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂和DNAsiRNA以生成高效bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物。如果想将粘附于管壁的复合物离心到管底,请务必使用极低转速离心,如80g离心5秒钟足够,离心转速太高将显着降低bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不效率。

对于难转细胞如MDCK, MB2231C2C12SaoS-2等bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不效率很低。

使用了错误的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不操作步骤。

在使用GenJet?LipoD293?PolyJet?bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂对MDCK, MB2231C2C12SaoS-2等难转细胞进行bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不操作时,建议使用Advanced Protocol

细胞毒性大

DNA用量太大。

建议绘制量效关系曲线来确定最佳的DNA用量。

bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂用量太大。

建议绘制量效关系曲线来确定最佳的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂用量。

细胞密度太低。

bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不DNA时,建议细胞密度控制在~70%左右;bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不siRNADNA/siRNA共bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不时,建议细胞密度控制在50~70%为宜,细胞密度太低可导致bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不过程 细胞毒性增加。

bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不时细胞状态已经较差。

我们所生产的所有bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂其bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不效率均不受培养液中的血清影响,因此建议bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不过程中细胞的培养液使用含有10%胎牛血清和抗生素的完全培养液以改善细胞的状态。

稳定bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不时抗生素加入时机太早。

在bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不48小时后加入选择用抗生素。

使用PepMute?GenMute?或者PepMute? Plus siRNA bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂时毒性太大。

错误地使用了含有血清和抗生素的DMEM培养液来稀释bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂和siRNA

使用PepMute?, GenMute?, GenJet?PowerFect? siRNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂时,我们推荐务必使用特制的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不缓冲液来稀释bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂和siRNA以形成高效的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物并降低细胞毒性。

bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不效果不稳定,不能重现。

bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不时细胞密度没有控制的较为均一,差异太大。

严格控制细胞生成条件,务必使每一次bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不时细胞的密度较为均一。如果细胞传代太多,建议重新复苏一批新鲜细胞进行培养。

bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂有时呈云雾状浑浊。

bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂储存问题太低。

请务必不要低温保存bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂,+4度环境即可;如果将bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂误放在-20以下环境,建议将冰冻的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂(LipoD293?LipoJet?bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂除外)温浴10分钟后,待完全融化后,再进行bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不操作。一般情况下不会导致bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不效率降低。

bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物出现沉淀。

有过量的EDTA存在。

DNA溶于纯水而不是TE缓冲液.

在形成bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物时,有过量的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂或DNA/siRNA存在。

确保在bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物形成过程中,bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂和DNA或者siRNA的用量最好不要超过标准错作步骤推荐的剂量。

siRNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不时,基因沉默效率不够高。 没有使用特制的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不缓冲液来稀释bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂和DNA/siRNA 使用PepMute?, GenMute?, GenJet?PowerFect? siRNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂时,我们推荐务必使用特制的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不缓冲液来稀释bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂和siRNA以形成高效的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不复合物。
所使用的siRNA浓度此优化。 使用PepMute?, GenMute?, GenJet?PowerFect? siRNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂时,我们推荐的siRNA终浓度为1.0~50 nM,对较易转的细胞,siRNA终浓度以5 nM为宜,对难转细胞可以考虑提高到50 nM
DNA-siRNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不时,基因沉默效率不够高。 没有使用特制的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不缓冲液来稀释bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂和DNA/siRNA 使用PepMute?, GenMute?, GenJet?PowerFect? siRNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂时,我们推荐务必使用特制的bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不缓冲液来稀释bet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂和DNA/siRNA
所使用的siRNA浓度太高或者太低。 使用PepMute?, GenMute?, GenJet?PowerFect? siRNAbet356家网_bet356注册送38_bet356靠谱不试剂时,我们推荐的siRNA终浓度为1.0~50 nM,对较易转的细胞,siRNA终浓度以5 nM为宜,对难转细胞可以考虑提高到50 nM

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